精母细胞来源外泌体中的piR-1207/2107靶向调控精囊上皮细胞精囊凝胶蛋白1基因表达的体外实验研究

摘要

目的探究精母细胞来源外泌体中的piR-1207/2107对精囊上皮细胞(HSVEpiC)精囊凝胶蛋白1(SEMG1)基因表达影响。方法采用超高速离心法提取精母细胞上清液中的外泌体,运用透射电镜、纳米激光粒度分析仪、外泌体表征蛋白鉴定精母细胞来源的外泌体;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外泌体中piR-1207/2107的表达情况;采用蛋白免疫印迹(Western blot)检测精母细胞来源的外泌体中PIWIL1蛋白的表达情况;通过生物信息学软件RNAhybrid预测piR-1207和piR-2107可共同调控的潜在靶基因。在HSVEpiC中分别转染piR-1207/2107模拟物(piR-NC-mimic、piR-1207-mimic、piR-2107-mimic)或piR-1207/2107抑制剂(Anti-piR-NC、Anti-piR-1207、Anti-piR-2107),Western blot检测转染后各组SEMG1蛋白的表达情况。在精母细胞中分别转染Anti-piR-NC、Anti-piR-1207、Anti-piR-2107,提取外泌体与HSVEpiC共培养24 h,采用qRT-PCR检测各组piR-1207/2107的表达情况,并采用Western blot检测SEMG1蛋白的表达情况。结果透射电子显微镜结果显示,精母细胞来源外泌体呈圆形或椭圆形膜性小囊泡;纳米激光粒度分析仪检测结果显示,外泌体的直径主要分布在100~200 nm之间。qRT-PCR检测结果显示,精母细胞来源的外泌体含有piR-1207/2107;Western blot检测结果显示,精母细胞来源的外泌体中未检测到PIWIL1蛋白。应用生物信息学软件RNAhybrid预测结果显示,piR-1207和piR-2107可以共同靶向结合SEMG1 mRNA的CDS区。HSVEpiC转染piR-1207/2107模拟物后,与piR-NC相比,piR-1207/2107表达量显著升高(P<0.001),而SEMG1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);HSVEpiC转染piR-1207/2107抑制剂后,与Anti-piR-NC相比,piR-1207/2107表达量显著降低(P<0.001),而SEMG1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。精母细胞转染Anti-piRNAs后提取外泌体与HSVEpiC共培养,piR-1207/2107表达量显著降低,而SEMG1蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。结论精母细胞来源外泌体中的piR-1207/2107可调控HSVEpiC中SEMG1的表达。