用人外周血线粒体DNA4977bp缺失检测辐射损伤初探

摘要

初步探索用聚合酶链反应(PCR)方法进行辐射诱导的线粒体DNA4977bp缺失分析的可行性.对正常人外周血进行2Gy 60Co γ射线的照射,照射后提取包含线粒体DNA的全基因组DNA,用PCR方法进行线粒体DNA4977bp缺失分析,同时扩增很少缺失的线粒体DNA片段(16S-ND1);进而比较照射前后线粒体DNA4977bp缺失水平.结果表明,用于分析线粒体DNA 4977bp缺失的引物对在最佳试验条件下,可特异性扩增出所有2Gy照射诱导的线粒体DNA 4977bp缺失;该扩增产物经纯化、测序和核苷酸同源性分析,证实线粒体缺失发生在线粒体DNA序列的8470-13446bp.用于扩增16S-ND1的引物对在很大的温度变动范围内,均能扩出目的DNA片段.所有外周血样品在照射前无线粒体DNA 4977bp缺失,2Gy 60Coγ射线照射后特异诱导出此缺失.说明用本研究中建立的PCR方法,可用来分析电离辐射诱导的外周血有核细胞线粒体DNA4977bp缺失水平.