慢病毒介导的RNA干扰沉默RRS1基因对乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响

摘要

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰技术抑制RRS1表达对人乳腺癌细胞MCF-7生物学行为的影响。方法采用Western blot方法检测RRS1在MCF-7与正常乳腺上皮细胞HMEC中的表达;分别构建携带绿色荧光蛋白的shRNA-RRS1慢病毒和阴性对照慢病毒RNA干扰系统,分别感染MCF-7细胞,即得到shRRS1实验组和shCtrl阴性对照组MCF-7细胞;采用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测两组细胞的mRNA及蛋白表达,确定敲减效率;采用MTT法连续6d检测两组细胞增殖活力;采用PI染色流式细胞术检测两组细胞的细胞周期分布;采用DAPI荧光染色、Annexin V-APC单染流式细胞术及Caspase 3/7实验检测两组细胞凋亡情况;采用Transwell实验检测两组细胞迁移能力的变化。结果实验组中RRS1的表达明显高于HMEC(P<0.05);与对照组相比,实验组RRS1mRNA和蛋白水平均明显降低(P<0.05),细胞活力显著减弱(P<0.05),G1期细胞明显增加(P<0.05),且实验组细胞发生典型的凋亡形态学改变,凋亡率显著增高(P<0.05),细胞迁移能力显著降低(P<0.05)。结论 RRS1在乳腺癌细胞MCF-7中高表达。敲减RRS1基因能明显诱导乳腺癌细胞凋亡及周期阻滞,同时使得细胞迁移能力明显降低。