大鼠肝移植自发免疫耐受模型CD4+CD25+和CD8+CD28-调节性T细胞的变化

摘要

目的:比较CD8+CD28-,CD4+CD25+调节性T细胞(T regulatory cells,Treg)及其亚群表型在大鼠自发免疫耐受形成中的变化,并探讨其在肝移植免疫耐受形成中的作用.方法:(1)建立雄性Brown Norway近交系大鼠(简称BN)到Lewis近交系大鼠(简称LEW)原位肝移植免疫耐受模型(存活＞120 d),取同周龄LEW大鼠作为对照组,应用梯度离心法分离外周血及脾单个核细胞,应用流式细胞仪检测CD8+CD28-,CD4+CD25+T细胞亚群比例;(2)应用免疫磁珠分离方法,通过间接法阴性分选和直接法阳性分选两步分离纯化CD8+CD28-,CD4+CD25+T细胞,并对其亚型表型进行检测,比较它们在移植耐受前后的差别.结果:(1)耐受组大鼠外周血及脾单个核细胞中CD8+CD28-,CD4+CD25+调节性T细胞的比例同对照组比较:CD8+CD28-T细胞增高,外周血为(30.2±5.8)%比(16.4±6.1)%,脾为(23.7±7.2)%比(13.4±5.5)%,P＜0.01;CD4+CD25+T细胞无明显差别,外周血为(9.9±3.5)%比(10.4±4.2)%,脾为(15.1±3.7)%比(14.7±4.6)%,P＞0.05.(2)CD8+CD28-,CD4+CD25+T细胞的亚型表型检测,①CD8+CD28-T细胞:耐受组为CD152(CTL-4)-,CD11b+,CD25-,CD45RO+;对照组为CD152(CTL-4)-,CD11b+,CD25-,CD45RO部分表达(76%);②CD4+CD25+T细胞:耐受组为CD152(CTL-4)+,CD11b+,CD28+,CD45 RO+;对照组为CD152(CTL-4)+,CD11b+,CD28+,CD45 RO+.结论:CD8+CD28-Treg细胞在耐受组大鼠外周血及脾单个核细胞中的比例明显增高,而CD4+CD25+Treg细胞则无明显改变,提示CD8+CD28-Treg细胞在大鼠肝移植自发耐受的形成中的作用可能更为重要;CD152(CTL-4)在两种Treg细胞表达差别可能是引起它们作用及表现不同的重要原因;黏附分子CD11b可能同两种Treg细胞的功能均密切相关;CD8+CD28-Treg细胞包含着不同亚群,而CD45RO表达的增加可能同CD8+CD28-Treg细胞发挥抑制功能密切相关.