不同炎症状态下犬年轻恒牙牙髓干细胞增殖及成骨分化能力的改变

摘要

目的:探究不同炎症状态对比格犬(Beagle犬)年轻恒牙牙髓干细胞增殖及成骨能力的影响,为炎症牙髓干细胞的应用提供理论依据。方法:选取Beagle犬年轻恒前磨牙14颗,通过开髓后牙髓暴露的方法建立牙髓炎模型。对照组于开髓后立即拔髓,实验组分别于术后2周和6周拔出牙髓组织。HE染色确定牙髓炎症程度,提取不同炎症状态下牙髓组织RNA,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)家族IL-1β、IL-6、IL-10的表达。酶消化法分离培养正常牙髓干细胞(dental pulp stem cell,DPSC)和炎症牙髓干细胞(inflammatory DPSC,IDPSC),细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法测定其生长曲线,并对其进行成骨分化诱导,茜素红染色,real-time PCR检测成骨相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达情况。结果:开髓暴露2周和6周后,根管内仍有存活的牙髓组织,伴有不同程度的炎症细胞浸润,6周组牙髓中炎症因子高表达。各组牙髓均可分离培养出牙髓干细胞,IDPSC的增殖能力强于DPSC。经成骨诱导后实验组细胞BSP、ALP和DSPP的表达均显著高于DPSC(P<0.01),但6周组表达显著低于2周组(P<0.01)。结论:Beagle犬年轻恒牙早期牙髓炎症状态下,牙髓干细胞的增殖和成骨分化能力均有所增强。