草菇菌种退化相关分子标记的筛选

摘要

[目的]基于SRAP分子标记技术,筛选出与草菇(Volvariella volvacea)菌丝退化性状紧密连锁的分子标记,为进一步研究目标性状基因的克隆与功能奠定基础.[方法]以草菇正常生长菌株V51(对照)与其菌丝退化菌株(VNM1～10)为材料,采用群体分离分析法分别构建2种草菇的近等基因池.利用SRAP分子标记技术,寻找两类菌株的差异片段,回收差异片段后与pMD-18T载体连接,构建重组质粒pMD-VNMDF并转化E.coli DH5α感受态细胞,将筛选的阳性克隆测序.根据差异片段序列设计引物,将其转化成SCAR分子标记,并对草菇正常菌株V51及其菌丝退化菌株VNM进行扩增试验,验证该标记的真实性和可靠性.[结果]81对SRAP引物组合中有2对引物可扩增出稳定差异条带,其中引物对Me8-Em4 PCR扩增出长度约300 bp的差异条带(命名为VNMDF)存在于退化菌株中.对SRAP分子标记片段VNMDF回收、测序并进行序列分析发现,该片段长度为279 bp,其核酸、氨基酸序列与编码26S蛋白酶体亚基的相似性分别达到81％和93％.利用SCAR特异引物对SCAR250可在菌丝退化菌株中稳定扩增出长度约250 bp片段,与预期大小(279 bp)一致,而在正常菌株中未扩增出此片段.[结论]获得了1条可能与草菇菌丝退化性状基因紧密连锁的SRAP分子标记,并将其成功转化为SCAR标记(SCAR250).