大豆凝集素和脂肪氧化酶双价RNAi表达载体的构建及其遗传转化

摘要

[目的]应用RNA干扰技术,同时抑制大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)和脂肪氧化酶(Lipoxygenase,Lox)基因在种子中的表达,改良大豆营养品质,为培育优质大豆材料奠定基础.[方法]根据RNAi原理,酶切获得Lox目的片段,构建以除草剂Bar基因为筛选标记、种子特异性启动子P7αP启动SBA和Lox双干扰的pCAMBIA3301-SBA-Lox(pSBA-Lox)干扰表达载体,并通过农杆菌介导法转化大豆(品种为吉农28),采用PCR、Southern杂交和实时荧光定量PCR对转基因植株进行检测.[结果]质粒PCR和酶切鉴定结果表明,双价RNAi植物表达载体pSBA-Lox构建成功.将其转入到大豆中,对转化植株进行PCR、Southern杂交检测,结果显示,外源基因以单拷贝形式整合到植物基因组中,并能遗传给后代.T1代转基因植株的实时荧光定量PCR分析显示,转基因植株中SBA基因和Lox基因在籽粒中的表达量比未转化受体植株均明显降低,SBA基因表达量降低了35.9％～47.2％,Lox基因表达量降低了32.8％～56.1％,而在幼嫩叶片中的表达量相比对照植株变化不大.[结论]获得了大豆凝集素和脂肪氧化酶表达量均明显降低的T1代转基因大豆.