产气荚膜梭菌肠毒素肽段与Claudin4特异性结合对哺乳动物表皮屏障通透性的调控

摘要

目的:探讨产气荚膜梭菌肠毒素肽段(Clostridium perfringens enterotoxin,cCPE 194-319)对哺乳动物表皮屏障通透性的影响.方法:首先利用SWISS-MODEL软件模拟分析了cCPE194-319与Claudin4(Cldn4)结合的结构模型,然后通过细胞免疫荧光染色法和跨内皮细胞电阻法(trans-epithelial electrical resistance,TEER)检测cCPE194-319对人源永生化表皮细胞HaCaT膜蛋白Cldn4表达定位的影响和细胞层紧密性的影响,最后在小鼠中利用葡聚糖-罗丹明荧光素扩散法观察经cCPE 194-319处理后的小鼠表皮的荧光素渗透变化情况.结果:cCPE194-319可与HaCaT细胞中Cldn4蛋白特异性结合,随着作用时间的增加,cCPE194-319结合Cldn4蛋白后形成复合体从HaCaT细胞膜上向细胞质中转移,TEER值降低;当洗脱cCPE194-319后,新合成的Cldn4蛋白可重新定位到细胞膜上,TEER值升高.小鼠体内实验表明,cCPE194-319处理后的小鼠表皮渗透性增强.结论:cCPE194-319能够通过与Cldn4蛋白的特异性结合,从而调控哺乳动物表皮屏障的通透性.