狼毒(月腺大戟)主要萜类效应成分模拟醋制前后对巨噬细胞致炎毒性及肾脏细胞AQPs表达的差异研究

摘要

目的探究狼毒效应部位中主要萜类成分模拟醋制前后毒、效作用变化,阐释狼毒醋制解毒存效的机制,探寻狼毒醋品质量标志物。方法将狼毒萜类成分Eupractenoid A(EA)、Jolkinolide B(JNB)、Fischeria A(FA)采用模拟醋制法在160℃加6%冰醋酸加热40 min,以Western blot法分析3种萜类成分醋制前后对巨噬细胞RAW264.7中TNF-α和IL-1β蛋白表达水平影响的差异;以Western blot法分析3种萜类成分醋制前后对肾小管上皮细胞HK-2中AQP1及肾集合管上皮细胞mIMCD3中AQP2、3、4蛋白表达水平影响的差异。结果EA、JNB、FA可诱导巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-1β蛋白表达水平显著增高(P<0.05)。EA、JNB、FA醋制后致炎毒性均显著下降。EA主要转化产物Euphebracteolatin A(EHTA)无明显促炎毒性。药效评价显示,EA及其模拟醋制产物可显著抑制AQP1、3、4蛋白表达(P<0.05),EA醋制后对AQP1、2、4蛋白表达的抑制作用显著增强(P<0.05)。EHTA对肾细胞AQP1、2、3蛋白表达的抑制作用显著强于EA(P<0.05),对AQP4蛋白表达的抑制作用与EA相比无显著性差异,表明EA醋制可增强药效。JNB可显著抑制AQP1、3蛋白表达(P<0.05)。其模拟醋制产物可显著抑制AQP1、2、3、4蛋白表达,且JNB醋制后对AQP2、3、4蛋白表达的抑制作用显著增强(P<0.05),表明JNB醋制后药效增强。FA醋制后对AQPs调节作用显著降低(P<0.05),但高剂量组仍起作用。结论狼毒主要萜类效应成分经模拟醋制后致炎毒性减弱,但醋制后药效总体呈现增强或保留。同时EA转化产物EHTA无明显促炎毒性,药效作用强于其转化前体EA,可作为狼毒醋制品质量控制指标。