金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraPL-Lectin特异性抗体的制备及其功能分析

摘要

目的:制备金黄色葡萄球菌富丝氨酸重复蛋白SraPL-Lectin单克隆抗体,并分析其体外功能.方法:以USA300基因组为模板,PCR扩增SraPL-Lectin基因序列,克隆到pET28a表达载体中,0.1 mmol/L IPTG 25 ℃诱导6h,镍柱亲和层析纯化SraPL-Lectin-His蛋白.以纯化的SraPL-Lectin-His重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用常规融合技术制备杂交瘤细胞,间接ELISA法、West-em blot法筛选和鉴定阳性杂交瘤细胞株.扩大培养阳性细胞株后注射小鼠腹腔,收集腹水,经Protein G柱纯化anti-SraPL-lectin单克隆抗体.以不同终浓度的单克隆抗体预先孵育A549细胞和注射小鼠腹腔,涂板计数单克隆抗体阻断细菌黏附、侵入和感染的能力.结果:成功构建了SraPL-Lectin-pET28a重组表达载体,经镍柱纯化后获得高纯度的重组蛋白,获得稳定分泌单克隆抗体的细胞株,小鼠腹水经Protein G柱纯化后获得纯度高达95％以上的特异性抗体,效价1:32万.终浓度100 ng/mL单克隆抗体预先孵育A549细胞2h,能够显著降低金黄色葡萄球菌对A549细胞的黏附和侵入.提前ld向小鼠腹腔注射1μg anti-SraPL-Lectin单克隆抗体,能够显著降低小鼠血液中的金黄色葡萄球菌数量.结论:本研究制备的anti-SraPL-Lectin单克隆抗体能够阻断金黄色葡萄球菌对宿主细胞的黏附和侵入,为将SraPL-Lectin作为防控金黄色葡萄球菌感染药物靶点的研发奠定了基础.