miR-335通过下调Fra-1表达抑制人乳腺癌细胞增殖机制的实验研究

摘要

目的 探讨微小核糖核酸(microRNA,miR)-335对人乳腺癌细胞增殖能力的影响,以及其可能存在的机制。方法 体外培养乳腺癌细胞及正常乳腺组织细胞,检测miR-335及Fros相关抗原1(fros related antigent-1,Fra-1)的表达量;体外转染miR-335 mimics后,通过细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞的增殖能力,检测Fra-1的表达变化及下游细胞增殖相关蛋白分子基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)的表达量;生物信息学预测及双荧光霉素报告基因验证Fra-1为miR-335作用靶基因。结果 乳腺癌细胞中miR-335的表达量(0.755±0.034)低于正常乳腺细胞(1.495±0.029),Fra-1蛋白的表达量(2..347±0.120)高于正常乳腺细胞(1.319±0.038),差异均有统计学意义(t=0.075,4.191,均P<0.001)。转染mi R-335 mimic后48,72 h乳腺癌细胞增殖能力(0.881±0.062,0.887±0.082)低于对照组细胞(1.326±0.051,1.493±0.038),差异均有统计学意义(t=44.096,59.307,均P<0.001);转染miR-335 mimic后乳腺癌细胞中Fra-1的蛋白表达量(0.567±0.091)低于未转染细胞(2.347±0.204),差异有统计学意义(t=3.763,P<0.001);转染miR-335 mimic后细胞中MMP-9(0.469±0.027),VEGF-C(0.540±0.041)的蛋白表达量低于对照组(0.958±0.058,1.024±0.171),差异均有统计学意义(t=1.953,7.856,均P<0.001);荧光霉素报告基因实验结果显示miR-335下调Fra-1启动子核心转录区域(-164~-52nt)的转录活性。结论 miR-335通过抑制MMP-9和VEGF-C的表达,并下调Fra-1启动子转录活性,抑制了体外乳腺癌细胞的增殖。