miR-33b靶向上游转录因子1基因调控喉癌细胞的作用机制

摘要

目的微小RNA-33b(miR-33b)是否可通过靶向调控上游转录因子1(USF1)而参与喉癌发生发展过程尚未明确。文中旨在探讨miR-33b靶向USF1对喉癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响及机制。方法选取2016年5月至2018年6月华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院43例喉癌患者的喉癌组织标本及癌旁组织标本。采用qRT-PCR与Western blot检测喉癌组织及喉癌TR-LCC-1细胞中miR-33b、USF1的表达。分别将miR-33b mimics及miR-con、si-USF1及si-con转染至TR-LCC-1细胞,分为正常组(常规培养的TR-LCC-1细胞)、miR-con组(miR-con转染至TR-LCC-1细胞)、miR-33b组(miR-33b mimics转染至TR-LCC-1细胞)、si-con组(si-con转染至TR-LCC-1细胞)、si-USF1组(si-USF1转染至TR-LCC-1细胞)、miR-33b+pcDNA组(miR-33b mimics与pcDNA共转染至TR-LCC-1细胞)、miR-33b+pcDNA-USF1组(miR-33b mimics与pcDNA-USF1共转染至TR-LCC-1细胞)。MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-33b的靶基因并通过Western blot检测靶基因USF1蛋白表达;Western blot检测Ki-67、MMP-2、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果与癌旁组织(1.00±0.32)比较,喉癌组织中miR-33b的表达水平(0.52±0.23)显著降低(P<0.05),USF1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。与miR-con组比较,miR-33b组TR-LCC-1细胞的细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2蛋白、Bcl-2蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),TR-LCC-1细胞的细胞凋亡率、TR-LCC-1细胞中miR-33b、Bax、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。与si-con组比较,si-USF1组喉癌TR-LCC-1细胞中USF1蛋白相对表达量、TR-LCC-1细胞的细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2、Bcl-2蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05)。与miR-33b+pcDNA组比较,miR-33b+pcDNA-USF1组喉癌TR-LCC-1细胞中USF1蛋白相对表达量、细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2、Bcl-2蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论miR-33b靶向调控USF1抑制喉癌细胞增殖、迁移及侵袭,诱导细胞凋亡,为阐明喉癌的发病机制奠定实验基础。