G蛋白耦联受体C家族6组A亚型在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

摘要

目的 前列腺癌(PCa)在我国的发病率逐年上升.G蛋白耦联受体C家族6组A亚型(GPRC6A)是近年来发现的PCa易感基因.文章探讨GPRC6A及其介导的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在前列腺癌LncapC4-2细胞增殖与凋亡中的作用.方法 实验分为LncapC4-2 PCDH组(仅转染空载体pCDH)、LncapC4-2 GPRC6A组(仅转染pCDH-GPRC6A)和LncapC4-2 GPRC6A+U0126组(转染pCDH-GPRC6A并加入U0126处理),通过CCK8检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡改变以及Western blot方法检测细胞周期与凋亡相关蛋白的变化.结果 Western blot法结果表明,与LncapC4-2 PCDH组比较,LncapC4-2 GPRC6A组的GPRC6A和P-ERK表达增加(P＜0.05);与LncapC4-2 GPRC6A组比较,LncapC4-2 GPRC6A+U0126组的P-ERK的表达明显降低(P＜0.05).CCK8检测表明LncapC4-2 GPRC6A组相较LncapC4-2 PCDH组增殖加快(P＜0.05),而LncapC4-2 GPRC6A+U0126组相较LncapC4-2 GPRC6A组增殖明显减慢(P＜0.05).流式细胞仪检测结果显示LncapC4-2 GPRC6A组的G1/(S+G2)值较LncapC4-2 PCDH组明显降低(P＜0.05);LncapC4-2 GPRC6A+U0126组的G1/(S+G2)值较LncapC4-2 GPRC6A组明显升高(P＜0.05).Western blot结果中LncapC4-2 GPRC6A组的CyclinD1蛋白表达(0.88±0.04)较LncapC4-2 PCDH组(0.66±0.02)明显升高(P＜0.05),而LncapC4-2 GPRC6A+U0126组的CyclinD1蛋白表达(0.71±0.02)较LncapC4-2 GPRC6A组明显降低(P＜0.05).流式细胞仪检测凋亡结果表明,LncapC4-2 GPRC6A组的凋亡比例(3.64％)较LncapC4-2 PCDH组(9.00％)和LncapC4-2 GPRC6A+U0126组(19.57％)明显降低(P＜0.05).同时Western blot检测结果表明,LncapC4-2 GPRC6A组的Bcl2的表达比LncapC4-2 PCDH组高,活化Caspase3的表达则降低(P＜0.05);LncapC4-2 GPRC6A+U0126组相对于LncapC4-2 GPRC6A组Bcl2的表达降低,活化Caspase3的表达则增高(P＜0.05).结论 GPRC6A可能通过ERK信号通路促进PCa细胞增殖,抑制细胞凋亡,而参与PCa的发展过程.