功能性受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白-Huh7细胞株的构建及其HBV易感性

摘要

目的功能性受体钠离子牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)表达短暂,导致乙型肝炎病毒(HBV)感染肝癌细胞模型的效率低下且不稳定。文中旨在将GV358-NTCP转染Huh7细胞构建NTCP-Huh7细胞,并鉴定其是否具有HBV易感性。方法使用GV358作为慢病毒载体,和NTCP编码基因连接后获得重组质粒GV358-NTCP,构建NTCP基因重组慢病毒,将GV358-NTCP转染Huh7细胞构建NTCP-Huh7细胞。采用HBV感染NTCP-Huh7细胞(NTCP-Huh7组)和Huh7细胞(Huh7组)。将HBV分别与NTCP-Huh7组和Huh7组细胞共孵育18 h,换液后继续培养,并在第2、4、6、8、10、12天做相关检测。检测上清中HBsAg、HBeAg、HBc Ag、HBV DNA以及细胞内HBV ccc DNA含量,确定NTCP-Huh7重组细胞是否具有HBV易感性。结果 Western blot结果表明NTCP-Huh7细胞株可稳定表达NTCP蛋白。其孵育第8天,NTCP-Huh7组HBsAg、HBeAg(0.866±0.040、0.603±0.053)明显高于Huh7组(0.237±0.063、0.209±0.112),且在第8天达到最高峰,第4、6、10天亦明显高于Huh7组(P<0.05)。NTCP-Huh7组第4、6、8、10、12天上清中HBV DNA、HBV ccc DNA明显高于Huh7组(P<0.05)。免疫荧光法显示NTCP-Huh7细胞内检测到核心抗原,Huh7细胞内未检测到。结论构建GV358-NTCP重组质粒转染Huh7后,获得的NTCP-Huh7细胞具有HBV易感性。