肽抗生素hPAB-β基因串联体的构建及原核细胞表达初探

摘要

目的 :　构建肽抗生素hPAB β基因多拷贝串联体重组质粒 ,实现目的基因串联产物在大肠杆菌中的高效表达。　方法 :以表达质粒pQE 32为载体 ,利用同裂酶PstⅠ与AvaⅢ能产生相同粘端的特性 ,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等操作 ,构建含不同数目hPAB β基因的串联体。对获得的重组菌用异丙基巯基半乳糖 (IPTG)诱导表达 ,Tricine SDS PAGE观察串联体融合蛋白的表达情况。　结果 :构建了一至八拷贝的串联体重组质粒 ,经酶切、DNA测序分析表明 ,各串联体的DNA序列及阅读框完全正确。Tricine蛋白电泳显示 ,各串联体的阳性转化菌株经IPTG诱导后均能表达出目的融合蛋白 ,相对分子质量与预期结果相符 ,表达量占细菌总蛋白的 1 0 %～2 2 %。但八拷贝较其他串联体表达率有所降低。　结论 :hPAB β基因串联体重组表达质粒的成功构建 ,为大量制备目的肽抗生素奠定了基础 ,并为其他小分子生物活性肽的制备提供了参考。