人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究

摘要

目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS-B)抗原.方法:PCR扩增SS-B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k-SS-B.用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫酶斑点法鉴定.结果:PCR产物约为1 200bp,与预期1 224bp接近;pPIC9k-SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确.表达产物SS-B的相对分子质量约48 000,高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平,表达量占分泌总蛋白的60%以上,产物浓度为800～900mg/L.免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS-B分子的免疫原性.阴性对照菌未见目的表达条带.结论:SS-B在巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达,为下一步研究打下了基础.