盐酸小檗碱抑制PI3 K/AKT/mTOR通路的活化对结肠癌SW480细胞生长、 凋亡和自噬的调节作用

摘要

目的 探究盐酸小檗碱抑制PI3K/AKT/mTOR通路的活化对结肠癌SW480细胞生长、 凋亡和自噬的调节作用的机制.方法 体外培养结肠癌SW480细胞,并分为空白组(Control)、 低剂量盐酸小檗碱组(BH 25μmol/L)、 中剂量盐酸小檗碱组(BH 50μmol/L)、 高剂量盐酸小檗碱组(BH 100μmol/L)分别使用对应剂量的盐酸小檗碱预处理.使用1～500μmol/L浓度梯度的盐酸小檗碱处理48 h后,采用MTT检测细胞存活率;采用克隆形成实验检测细胞生长情况;采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况;采用免疫荧光检测LC3含量;采用Western印迹检测Ki67、Caspase-3、Beclin1,P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PI3K、AKT、mTOR表达情况.结果 MTT检测结果显示,随着盐酸小檗碱处理浓度增大细胞存活率降低,当剂量超过200μmol/L后差异有统计学意义(P<0.05);克隆形成实验显示,随着盐酸小檗碱处理浓度增大SW480细胞形成率降低(P<0.05);Hoechst 33258染色检测结果显示,随着盐酸小檗碱处理浓度增大SW480细胞凋亡率升高(P<0.05),免疫荧光检测结果显示,随着盐酸小檗碱处理浓度增大SW480细胞细胞内荧光点数显著增加(P<0.05);Western印迹检测结果显示,相比空白对照组,使用盐酸小檗碱处理各组Ki67、P62、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05)且呈计量依赖性,Caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达显著升高(P<0.05)且呈计量依赖性,LC3Ⅰ、PI3K、AKT、mTOR蛋白表达无显著差异(P>0.05).结论 盐酸小檗碱可以通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的活化实现抑制结肠癌SW480细胞的生长、 促进结肠癌SW480细胞的凋亡和自噬.