多聚嘧啶序列结合蛋白的表达、纯化及其与HBV转录后调节元件RNA结合的分析

摘要

目的 在大肠埃希菌中表达并纯化多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein,PTB)-His融合蛋白,并鉴定PTB与HBV转录后调节元件(HBV posttranscriptional regulatory element,HPRE) RNA的体外结合.方法 构建PTB-His融合蛋白的原核表达载体,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法进行纯化.用磁珠结合与Western 印迹的方法,验证PTB与HPRE RNA在体外的特异性结合.结果 成功构建了PTB-His融合蛋白的原核表达载体,并在体外大量表达后用亲和层析的方法得到了高纯度的PTB-His融合蛋白.磁珠结合沉淀与Western 印迹实验证明PTB与HPRE RNA在体外能特异性的结合.结论 体外表达的PTB融合蛋白能与HPRE RNA特异性的结合.