△Np73小干扰RNA表达质粒抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖

摘要

目的应用小干扰RNA技术抑制△Np73表达,探讨其对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响。方法制备△Np73小干扰表达质粒,脂质体法转染人乳腺癌细胞株MCF-7;荧光显微镜下观察转染细胞绿色荧光蛋白表达,计算转染效率;MTT法检测转染质粒后细胞增殖抑制率;实时荧光定量PCR检测细胞转染质粒后△Np73和TAp73 mRNA的表达;共转染pcDNA3-HA/DNp73α表达质粒与△Np73小干扰质粒,Western Blot检测细胞转染后△Np73和TAp73表达。结果成功构建并转染△Np73小干扰表达质粒,转染效率达62%。经△Np73质粒干扰的细胞增殖活性显著下降,与阴性对照组相比差异显著。△Np73小干扰质粒转染细胞能有效抑制内源性△Np73 mRNA和外源性△Np73蛋白表达,对TAp73无显著抑制作用。结论针对△Np73基因设计的小干扰RNA表达质粒能显著降低MCF-7细胞中△Np73 mRNA及蛋白的表达,抑制细胞生长增殖,表明靶向沉默△Np73可能为未来人乳腺癌的治疗提供了一个有效途径。