胡桃醌对宫颈癌细胞增殖的抑制作用及其机制

摘要

目的:比较胡桃醌对人乳头瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌Caski细胞、HPV阴性C33A细胞和敲减脯氨酰顺反异构酶1(Pin1)基因的Caski细胞(shCaski细胞)增殖的抑制作用,探讨其可能的作用机制。方法:构建表达Pin1 shRNA慢病毒载体用于感染细胞,筛选得到稳定的shCaski细胞。取对数生长期的Caski、shCaski和C33A细胞,分为正常对照组、10、20、50和100μmol·L^(-1)胡桃醌组,胡桃醌处理24 h后,采用MTT法检测各组的细胞增殖活性。取对数生长期的Caski细胞和C33A细胞,分为对照组和20μmol·L^(-1)胡桃醌组,各组细胞处理24 h后,流式细胞术检测各组不同周期细胞百分率和早期凋亡率,Hoechst33258荧光染色观察各组细胞形态表现,Western blotting法检测各组细胞周期和凋亡相关蛋白表达水平。结果:MTT实验,与正常对照组比较,不同浓度胡桃醌组Caski细胞增殖活性明显降低(P0.05);与对照组比较,20μmol·L^(-1)胡桃醌组Caski细胞早期凋亡率明显升高(P0.05);Western blotting法检测,与C33A细胞比较,Caski细胞中Pin1蛋白表达量明显升高;胡桃醌组Caski细胞和shCaski细胞中Pin1蛋白表达量明显低于对照组;与对照组比较,胡桃醌组C33A细胞中细胞周期相关蛋白表达水平明显改变;Caski细胞中磷酸化ATM(Patm)、磷酸化细胞周期检查点激酶2(pChk2)、216位丝氨酸磷酸化细胞分裂周期蛋白25c(pCdc25c Ser216)和pCdc25c Tyr216蛋白表达量升高,磷酸化细胞分裂周期蛋白25c(pCdc25c)蛋白表达量降低,Cdk1蛋白表达量变化不明显;与对照组比较,胡桃醌处理组Caski细胞中Bcl-2蛋白和线粒体CytC蛋白表达量降低,胞质CytC、Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved PARP蛋白表达量升高。结论:胡桃醌对HPV阳性宫颈癌细胞增殖抑制及促凋亡作用效果均强于HPV阴性细胞,其机制可能与胡桃醌特异性抑制Pin1基因有关。