人骨肉瘤蛋白质组双向凝胶电泳图像分析方法的建立与应用

摘要

目的:建立人骨肉瘤蛋白质组双向电泳图像分析方法.方法:组织标本分为骨肉瘤组和肿瘤旁组.对第一向双向电泳的关键因素与环节进行一系列优化.分离骨肉瘤总蛋白,银染,用ImageMasLer 2D Elite 3.01分析软件分析图谱,使用基质辅助电离解析飞行时间质谱仪主要高丰度部分差异蛋白质进行鉴定.结果:获得分辨率和重复性好的双向电泳图谱.变异系数平均值(%)和变异系数范围(%):骨肉瘤组为23.00±10.11和3.80～6.89,肿瘤旁组为20.33±9.90和2.70～6.89.同一蛋白质斑点在3次实验中等电点、分子量的相对标准差分别为(8.93±1.17)%、(10.16±2.02)%和(10.87±3.86)%.初步鉴定11个蛋白,其中9个蛋白质只在骨肉瘤中特异高峰度上调表达,分别为转甲状腺素蛋白、磷酸甘油醛异构酶、慢收缩骨骼肌钙蛋白T、心肌钙蛋白、肌动蛋白、肌球蛋白、膜联蛋白-5、热休克蛋白-1及Fanconi anemia groupD2蛋白;鉴定2个蛋白,锰超氧化物歧化酶、碳酸酐酶蛋白质下调表达.结论:成功构建了用于研究骨肉瘤蛋白质组双向凝胶图谱分析方法,认为初步鉴定的部分差异蛋白可能为骨肉瘤的关联蛋白,其在骨肉瘤发生和进展的病理过程中具有重要作用.