高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞FOXO1、TSC2基因表达及细胞分泌功能的影响

摘要

目的:研究罗格列酮在不同浓度葡萄糖条件下,对胰岛β细胞增殖凋亡与胰岛素分泌以及叉头转录因子-1(FOXO1)和结节性硬化症-2(TSC2)表达的影响.方法:将NIT-1细胞按每孔5×10~4个放置于24孔细胞培养板,培养48 h后随机分为各处理组:5.6、7.8、11.1、16.7、22.2和27.6 mmol·L~(-1)葡萄糖组,继续培养24 h后再分别施加1×10~(-5) mol·L~(-1) 罗格列酮,分别于干预24和48 h后取细胞培养上清液,采用放射免疫法检测胰岛素水平和免疫荧光法检测细胞增殖情况,RT-PCR半定量法检测FOXO1和TSC2 mRNA表达水平.结果:①1×10~(-6)～1×10~(-5)mol·L~(-1) 罗格列酮可以分别在不同浓度葡萄糖培养条件下使胰岛NIT-1细胞增殖(P<0.05),且这种变化趋势随剂量的增加而增加 (即1×10~(-5)mol·L~(-1)罗格列酮组>1 × 10~(-6)mol·L~(-1)罗格列酮组>1 × 10~(-7)mol·L~(-1)罗格列酮组).1×10~(-5)mol·L~(-1)的罗格列酮干预后,可见细胞凋亡百分率增加趋势随着葡萄糖浓度不断升高;②在同一浓度罗格列酮作用下,当葡萄糖浓度为11.1 mmol·L~(-1)时,胰岛素分泌水平最高,高于其他各组(均P<0.05),随着葡萄糖浓度增加,胰岛素分泌量逐渐下降(11.1 mmol·L~(-1)葡萄糖组>16.7 mmol·L~(-1)葡萄糖组>22.5 mmol·L~(-1)葡萄糖组>27.6 mmol·L~(-1)葡萄糖组),而葡萄糖为5.6 mmol·L~(-1)时,胰岛素分泌量最低;③在1×10~(-5)mol·L~(-1)罗格列酮干预后,FOXO1和TSC-2 mRNA的表达水平均较未干预组明显下降,且呈现出5.6 mmol·L~(-1)组<11.1 mmol·L~(-1)组<16.7 mmol·L~(-1)组<22.5 mmol·L~(-1)组<27.6 mmol·L~(-1)组的变化趋势,而且葡萄糖浓度>16.7 mmol·L~(-1)的各组均较前面小剂量葡萄糖组(≤11.1 mmol·L~(-1)各组) 表达明显.结论:罗格列酮可以通过直接影响胰岛β细胞内FOXO1和TSC2表达促进胰岛β细胞的增殖及影响细胞胰岛素分泌功能,提示通过调控FOXO1和TSC2表达,可以直接影响胰岛β细胞的生物学功能,如分泌功能、细胞的增殖与凋亡以及改善胰岛素抵抗状况.