人宫颈癌HeLa细胞氧化损伤中溶酶体与线粒体损伤的时间顺序及其意义

摘要

目的:探讨溶酶体及线粒体死亡途径在氧化应激诱导HeLa细胞凋亡过程中的时间顺序及其意义,阐明溶酶体膜通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中的重要作用.方法:以对数生长期人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,利用维生素K3(VK3)复制氧化应激模型,实验分为对照组、VK3 1 h、VK3 3 h、VK3 6 h和VK312h作用组.MTT法检测各组细胞生存率;2',7 '-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平,吖啶橙(AO)染色观察溶酶体膜通透性,罗丹明123染色检测线粒体膜电势(△Ψm),Westernblotting法检测凋亡相关蛋白caspase-3活化片段的表达.结果:与对照组比较,VK3 6和12h组HeLa细胞生存率降低(P＜0.05).Western blotting法检测,与对照组比较,VK3 6和12b组HeLa细胞内caspase-3活化片段表达水平增加(P＜0.05).DCFH-DA染色,VK3作用1、3及6 h,HeLa细胞内绿色荧光增强.AO染色,VK3 3 h和6h组可见HeLa细胞的溶酶体内红色颗粒状荧光减弱,细胞浆绿色荧光增强.罗丹明123染色,VK36h组可见HeLa细胞浆内红色荧光强度明显降低(提示△Ψm下降).结论:氧化损伤能够诱导溶酶体及线粒体死亡途径,并且溶酶体的变化先于线粒体,提示溶酶体通透性在氧化应激诱导线粒体凋亡过程中具有重要作用.