携带抗FAP×抗CD3双特异性抗体重组溶瘤痘病毒的构建及其抗癌活性观察

摘要

目的:构建携带抗成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)和抗小鼠CD3分子的双特异性抗体溶瘤痘病毒(rVVDD-BiTE.FAP),并体外检测该病毒对过表达FAP小鼠肺癌细胞株抑制作用.方法:利用同源重组技术将PF17R启动子调控的BiTE-FAP基因和PSEL启动子调控的DsRed基因克隆入缺失痘苗生长因子(vac-cinia growth factor,VGF)基因的vSC20亲本病毒TK基因处,经软琼脂空斑筛选获得VGF和TK双基因缺失的重组溶瘤痘病毒rVVDD-BiTE.FAP.采用空斑计数法比较重组溶瘤病毒和亲本病毒vSC20在小鼠肺癌细胞株中的复制能力;采用MTS法检测重组溶瘤病毒rVVDD-BiTE.FAP和rVVDD-GFP对小鼠肺癌LLC细胞株的抑制效果,并用MTS、LDH实验进一步检测溶瘤病毒和小鼠脾脏T细胞对靶细胞的协同杀伤效果,采用ELISA法检测细胞因子IL-2和IFN-γ的表达.结果:通过同源重组技术和软琼脂空斑法筛选获得rVVDD-BiTE.FAP重组溶瘤痘病毒.rV-VDD-BiTE.FAP与亲本病毒具有同等复制能力;小鼠T细胞能够增强rVVDD-BiTE.FAP抗肿瘤效果.结论:rV-VDD-BiTE.FAP具有高效抗肿瘤活性.