烟草和枸杞属间原生质体电融合再生杂种植株

摘要

烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ Ｌ．）叶肉原生质体和枸杞（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．）悬浮细胞原生质体在适宜电场条件下能以４％ —５％ 的频率发生异质融合。用过氧化物酶和超氧歧化酶同工酶方法对随机选取的１００ 个细胞系进行分析，发现杂种愈伤组织形成频率为９％ 。其中５个杂种细胞系具有分化能力，再生出大量丛生小苗。这些小苗多数在形态上兼有双亲特征并难以生根和长大。叶片酯酶同工酶分析表明，其中２ 个杂种细胞系（ＮＬ４ 和ＮＬ８）再生苗含有一条双亲没有的重组酶带。对亲本和杂种细胞系ＮＬ４ 的细胞学观察结果表明，杂种细胞系的染色体数目为２ｎ＝ ５５—８０，明显高于亲本。对亲本及ＮＬ４ 和ＮＬ８ 愈伤组织的基因组ＤＮＡ 进行ｒＤＮＡ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交发现，ＮＬ８ 含有双亲的全部谱带，且在３．０ ｋｂ 处出现１ 条新带；ＮＬ４ 没有枸杞的特征带，但在３．０ ｋｂ 和５．５ ｋｂ 处出现２ 条新带，说明这两个杂种中的双亲ｒＤＮＡ 可能已发生分子间重组。从ＮＬ４ 愈伤组织得到４ 株形态上近似烟草的完整植株。