柑橘细胞电融合参数选择及种间体细胞杂种植株再生

摘要

以“Ｐａｇｅ”橘柚（ＣｉｔｒｕｓｒｅｔｉｃｕｌａｔａＢｌａｎｃｏ×Ｃ．ｐａｒａｄｉｓｉＭａｃｆ）胚性悬浮系原生质体和粗柠檬（Ｃ．ｊａｍｂｈｉｒｉＬｕｓｈ）叶肉原生质体为融合试材，摸索了适合柑橘的电融合参数。研究表明，在ＡＣ（交变电场）１２５Ｖ／ｃｍ、ＤＣ（直流脉冲）１２５０Ｖ／ｃｍ、ＡＣ作用时间６０ｓ、ＤＣ脉冲时间５０μｓ、ＤＣ脉冲个数为３、ＤＣ脉冲间隔为０．５ｓ时融合率较高，双核异核体率可以达到１５％以上。利用不同类型原生质体比重的不同，融合后通过控制离心时间，可以收集到更高比例的双核异核体。融合产物经培养，３～４个月再生小植株。染色体计数结合形态学观察表明，再生的１５０株小植株中７８％为四倍体，其余为二倍体叶肉亲本再生类型。再生植株经过氧化物酶同工酶及ＲＡＰＤ分析，表明得到了体细胞杂种，还证明获得了１株叶肉亲本同源四倍体再生类型。