棕色固氮菌突变种UW3部分提纯的固氮酶CrFe蛋白溶液中残存细菌铁蛋白的晶体生长及鉴定

摘要

从无钼、无氨而含铬的固氮培养基中生长的棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii Lipmann)突变种UW3中纯化得到了部分纯的CrFe蛋白。在试图培养CrFe蛋白大晶体时发现，棕色晶体和砖红色晶体可同时或单独出现。SDSPAGE和厌氧天然PAGE皆表明，棕色晶体主要由与固氮酶钼铁蛋白(Avl)类似大小的亚基(～60kD)组成，而砖红色晶体则由～20kD亚基组成。免疫分析表明只有～60kD的亚基可与固氮酶钼铁蛋白的抗体反应，而～20kD亚基则无这种反应。在部分纯的CrFe蛋白溶液中，～20kD的总蛋白含量远低于～60kD蛋白的含量，表明由这种小亚基组成的蛋白只是CrFe蛋白溶液中的一种污染蛋白。用3，5-二氨基苯甲酸染色的天然电泳表明，形成砖红色和棕色晶体的蛋白是迁移率不同的两种含铁蛋白。质谱分析表明砖红色晶体蛋白为棕色固氮菌的细菌铁蛋白。分辨率为2．34A的X射线衍射结果也表明，砖红色晶体属于H3空间群，晶胞参数为a=124．965A^°，b=124．965A^°和c=287．406A^°。即将发表的三维结构解析表明，此砖红色晶体确为24聚体的细菌铁蛋白。