大鲵热应激同源蛋白70基因cDNA克隆及表达分析

摘要

结合同源克隆和RACE技术克隆大鲵热应激同源蛋白70基因（hsc70）cDNA序列全长,通过半定量PCR方法分析其在大鲵肾脏、脑、肺、皮肤、肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肌肉和垂体组织的表达特点。结果表明：大鲵hsc70基因cDNA全长为2 284 bp（GenBank登录号为HM998289）,其中3′端和5′端非翻译区分别为87 bp（1~87）和253 bp（2 032~2 284）,中间序列即编码区长为1 944 bp（88~2 031）,编码647个氨基酸（AA）;其核苷酸序列与其他物种相似性最高达83.5%,而编码的氨基酸序列则相对保守,与钝口螈的相似性达94%;根据其编码的AA序列构建进化树,结果大鲵hsc70首先与两栖类物种聚为一类,不同来源的hsc70基因与分类地位相似的物种分别聚类;半定量PCR结果表明,hsc70基因在大鲵的10种组织中都以较高的水平表达,但存在组织差异,在肾脏、脑、肺、皮肤、肝脏、胃、脾脏中表达量相对较高,在心脏中表达量次之,在肌肉和垂体中表达较低。