Effect of shRNA Inhibiting HIF1α Gene on TIMP1 Expression in RPE Cells

摘要

小发卡 RNA (shRNA ) 习惯于沉默在人的网膜的颜料的 HIF1 α基因在组织缺氧下面的上皮的房间(RPE ) 以便在矩阵 metalloproteinase 织物禁止者 1 的表示(TIMP1 ) 上观察基因 silencing 的效果。由使用化学 hypoxic inducer CoCl_2 模仿 RPE hypoxic 环境，对 HIF1 α mRNA 顺序的指向的区域的 shRNA 被一个方法综合在 vitro 抄写，和 HIF1，α被介入在组织缺氧下面有教养的 RPE (由 150 μ m ol/L CoCl_2 导致了) 。RT-PCR 被采用检测 HIF1 α和 TIMP1 的表示。HIF1 α和 TIMP1 的表示层次被 u-sing 测量西方的弄污。结果证明在 RPE 是有对 HIF1 α mRNA 的 specificshRNA 的 transfected 以后， RT-PCR 表明在组织缺氧下面，在 RPE 的 HIF1 α基因 silencing 的功效是 83。4 % 。西方的弄污表明 HIF1 α蛋白质的表示层次戏剧性地被扔。另外， RT-PCR 结果证明 TIMP1 mRNA 的表示被 28 减少。9 % ，和 TIMP1 蛋白质的表示层次被西方的弄污显著地也减少。shRNA 对 HIF1 α mRNA 指向了，这被建议能有效地沉默 HIF1 α基因，有效地随后禁止导致组织缺氧的 up-regula-tion ofTIMP1。