家蚕核型多角体病毒ORF 75基因的克隆及表达

摘要

根据GenBank发表的序列(L 33180)设计引物,利用PCR技术扩增了编码家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)ORF 75基因的DNA片段,将其连接至pMD18-T载体上,获得了该基因成熟蛋白阅读框序列.利用设计的酶切位点将目的基因从克隆载体上切下.表达质粒pGEX-4T-2经BamHI/XhoI双酶切,与目的片断连接,得到重组表达质粒pGEX/Bm75.将重组表达质粒pGEX/Bm75转化入大肠杆菌BL 21中,经IPTG诱导表达后,12% SDS-PAGE分析表明产生57 kDa左右的特异蛋白质条带.对表达产物进行Western blotting分析,结果表明,pGEX/Bm75经IPTG诱导产生的57 kDa蛋白条带与抗体发生了很强的交叉反应,融合蛋白得到了表达.