microRNA-199a-5p对口腔鳞状细胞癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的影响机制

摘要

目的:探究MicroRNA-199a-5p通过靶向激酶β(IKKβ)-核因子κB(NF-κB)信号通路影响口腔鳞状细胞癌细胞上皮间质转化及侵袭转移的机制.方法:将离体培养的SCC-25、CAL-27、TCA-8113、SCC-4 OSCC和293口腔鳞状细胞癌细胞分为空白对照组(n=24)、NC模拟组(n=24)和miR-199a-5p模拟物组(n=24).逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)分析miR-199a-5p和IKKβ的转录水平,CCK-8法检测细胞增殖水平,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,蛋白质印迹法检测抗IKKβ、总p65、核磷酸化(p-)p65、NF-κB(IκB)-α抑制剂、p-IκB-α、组蛋白H3、β-肌动蛋白及α-微管蛋白的表达水平,荧光素酶测定试剂盒定量检测NF-κB活性,进行Tran-swell迁移和侵袭分析肿瘤细胞的侵袭和迁移能力.结果:在OSCC细胞中miR-199a-5p表达下调(P<0.01);与无淋巴结转移的细胞比较,有淋巴结转移的OSCC细胞中miR-199a-5p表达降低(P<0.05);OSCC细胞SCC-25、CAL-27、TCA-8113和SCC-4中miR-199a-5p下调(P<0.05);RTPCR分析显示,与TCA-8113和SCC-4细胞的NC对照组比较,用miR-199a-5p模拟物转染后,miR-199a-5p的表达上调;CCK 8分析表明,与模拟NC转染的细胞比较,miR-199a-5p模拟物转染抑制了细胞活力,在TCA-8113和SCC-4细胞中观察到的凋亡诱导;流式细胞仪分析的结果表明,在miR-199a-5p过表达后,IKKβ表达下调,但在TCA-8113和SCC-4细胞中敲低miR-199a-5p后,IKKβ的表达上调;miR-199a-5p模拟物抑制了pIκB-α的水平,miR-199a-5p模拟物在蛋白质水平上均抑制了p65表达,p65的过表达抑制了ZEB1、TWIST1、E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达,减轻了miR-199a-5p对OSCC细胞的迁移和侵袭的抑制.结论:miR-199a-5p作为OSCC临床诊断和预后的潜在生物标志物,可能是OSCC治疗的有效抗癌靶标.