SV40大T抗原对人皮肤成纤维细胞生物学行为的影响

摘要

目的 :研究SV4 0大T抗原 (LT)基因对人正常皮肤成纤维细胞体外转化作用 ,以及转化后细胞生物学特性的改变 .方法 :采用脂质体介导的方法 ,利用含有LTcDNA的质粒psv3 neo转染人正常皮肤成纤维细胞 .G4 18筛选后 ,挑选阳性克隆扩大培养 ,观察基因及蛋白在细胞内的表达 ,以及对细胞增殖等生物学特性的改变情况 .结果 :分离获得转化细胞克隆 ,原位杂交显示LTmRNA在转染细胞胞质中表达 .免疫组化结果显示 ,细胞质中有SV4 0大T抗原表达 .细胞计数、Br dU、流式细胞仪检测表明 ,经过一段时间的旺盛生长 ,在转染后第 16代 ,细胞即进入危机期 ,以一种比衰老细胞更快的速度死亡 .结论 :LT可以促进正常皮肤成纤维细胞增殖 ,但这种能力是有限的 ,在转染后期甚至会促进细胞死亡 .所以要使人的正常皮肤成纤维细胞永生化 ,单纯利用LT的转染是不够的 。