扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属

摘要

目的 建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种,又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法.方法 从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12S rRNA基因序列,设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12S rRNA基因.以通用引物扩增片段为内部对照,以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定.结果 通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段;特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小:人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值:人100%、鸡99%、鸭100%;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2.5pg;特异引物扩增灵敏度人为2.5pg,鸡、鸭均为200pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出,不受另一种DNA量的干扰;盲测结果准确.结论 本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属.