Ni2+螯合的琼脂糖凝胶载体用于重组酶SUMO-Hep Ⅰ-His的固定化

摘要

以Ni2+螯合的琼脂糖凝胶(GLK-Gel Ni)作为固定化载体,对融合肝素酶Sumo-Hep Ⅰ-His的固定化进行了研究,实现了融合酶的一步纯化和固定化.通过对固定化条件的优化,得到较优的固定化体系:载体与粗酶质量比为30:1,固定化pH为7.0,吸附时间为6h,该条件下获得的固定化酶酶活10.07±0.35 IU/mL载体.酶学性质研究结果表明:固定化酶在30℃的热稳定性相对于游离酶显著提高,固定化酶半衰期是游离酶的8倍,最适反应温度提高了3℃,反应pH的耐受性也有了明显的提高.此外,与游离酶相比,固定化酶的储藏稳定性和可重复利用性良好,在4 ℃下放置60 d能保持76％的初始活性;固定化酶重复使用8次后,酶活仍剩余75.8％;而且GLK-Gel Ni载体本身具有良好的重复利用性,重复固定5次Sumo-Hep Ⅰ-His后,载体对酶的活性吸附仍能达到88.9％.整体而言,固定化Sumo-Hep Ⅰ-His显现了较好的工业应用潜能.