星突江鲽胰岛素样生长因子Ⅱ的原核表达与生物活性分析

摘要

根据鲽形目和鲈形目鱼类的IGF-Ⅱ基因保守序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆得到编码星突江鲽(Platichthys stellatus) IGF-Ⅱ成熟肽的全长cDNA序列(210 bp),同源性分析显示IGF-Ⅱ成熟肽在B、A和D区高度保守.利用原核表达载体pET-28a构建了重组表达质粒(IGF-Ⅱ/pET28a),转化大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,获得了N端含6个组氨酸的重组蛋白.37℃条件下用1.0 mmol/L的IPTG诱导6h,目的蛋白表达量最高,占菌体总蛋白的42.7％.重组蛋白主要以包涵体形式存在,经SDS-PAGE电泳检测,IGF-Ⅱ重组蛋白大小为11.4 kD,Western-Blotting免疫印迹呈阳性.包涵体经6 mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性后,获得了纯化IGF-Ⅱ蛋白.细胞增殖实验结果显示,重组蛋白可显著促进人胚胎肾细胞HEK293T的增殖,表明获得的IGF-Ⅱ重组蛋白具有细胞水平的生物活性.研究结果为深入研究星突江鲽IGF-Ⅱ的功能提供了基础资料.