黄颡鱼肝脏胞质中NADP依赖性的异柠檬酸脱氢酶(IDPc)的分离纯化和酶学性质

摘要

采用Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE Sepharose离子交换、Sephadex G-25凝胶过滤等方法对黄颡鱼肝脏胞质中NADP依赖性的异柠檬酸脱氢酶(IDPc)进行纯化,并研究其相关的酶学性质.结果显示,IDPc的比活力为7.94 U/mg,亚基分子量为36.7 ku.IDPc活性最大时的pH和温度分别为8.0和65℃,活化能为81.33 kJ/mol,底物米氏常数KmNADP和KmIC分别为0.056和0.175 mmol/L,底物最大反应速率VmNADP和VmIC分别为9.04和10.51 U/mg,催化效率KcatNADP和KcatIC分别为0.16和0.06 min/mg,产物NADPH对IDPc表现为竞争性抑制,抑制常数KiNADPH为0.034 mmol/L.IDPc的催化作用强烈依赖于金属离子Mn2+、Mg2+,没有金属离子存在时反应几乎不进行,二价金属离子激活IDPc的顺序为Mn2+＞ Mg2+＞ Zn2+＞ Ca2+＞ Cu2+,Cu2+几乎不能激活IDPc的活性.Ca2+和Zn2+既是激活剂也是抑制剂,与其作用浓度有关,Cu2+基本上对其无影响.通过对IDPc系统的酶学性质探讨,能够为深入研究IDPc催化与调节机制奠定基础.