超速离心结合CD63免疫磁珠分离口腔黏膜组织来源小细胞外囊泡的实验研究

摘要

目的:探索口腔黏膜组织来源的小细胞外囊泡(small extracellular vesicles,sEVs)分离富集的方法.方法:对口腔黏膜活检后的残余组织进行称重,胶原酶、蛋白酶抑制剂处理,300×g至10000×g离心,取上清进一步用超速离心、CD63免疫磁珠捕获等方式分离富集sEVs,分别通过透射电镜、纳米粒子追踪颗粒、蛋白定量等方法从形态学、颗粒粒径和数量、蛋白量等方面评价提取sEVs的效果,通过sEVs质量和组织质量的比值计算提取率.结果:超速离心可从微量口腔黏膜组织中获得sEVs,平均提取率为0.051％,但含有一定杂质颗粒,超速离心结合CD63磁珠捕获的sEVs杂质较少,但提取率仅为0.010％.结论:超速离心法对口腔黏膜微量组织sEVs的提取效率偏低;结合CD63免疫磁珠分离可提高提取纯度,然而提取量更少.未来需进一步优化条件,或结合微流控、核酸适配体等方法,有望提高sEVs的提取率和纯度.