小分子干扰RNA下调HIF-2α基因表达对人肝癌细胞HepG2体外凋亡的机制

摘要

目的 探讨小分子干扰RNA下调缺氧诱导因子-2α基因表达对人肝癌细胞株HepG2体外凋亡的影响,并研究其可能的分子机制.方法 采用不同浓度的氯化钴诱导细胞模拟缺氧,设计合成的特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA转染缺氧环境下HepG2细胞48 h后,采用逆转录聚合酶链式反应、免疫蛋白印记方法检测细胞中缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达,流式细胞术观察细胞凋亡率,半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9试剂盒检测细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性;免疫蛋白印记法检测凋亡相关因子B淋巴细胞/白血病-2、白血病-2相关x蛋白的表达.结果 低氧环境下,缺氧诱导因子-2α表达上调;特异性缺氧诱导因子-2αsiRN A转染HepG2细胞48 h后,转染组缺氧诱导因子-2αmRNA和蛋白表达下调(P<0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率升高(P<0.05),活性检测显示半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性升高,免疫蛋白印记法检测显示白血病-2表达下调,x蛋白表达上调(P<0.05).结论 特异性缺氧诱导因子-2αsiRNA可针对性的下调HepG2细胞中缺氧诱导因子-2α的表达,促进HepG2细胞体外凋亡,这一过程可能与下调白血病-2表达、上调x蛋白的表达及半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-9活性有关.