MiR-150-5p下调通过激活Wnt信号通路促进人牙周膜干细胞成骨分化及MMP2表达

摘要

目的:探讨mi R-150-5p在人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)成骨分化过程中的水平变化和其对hPDLSCs成骨分化的影响及相关机制。方法:采用有限稀释法分离培养h PDLSCs,对h PDLSCs进行成骨诱导,以mi R-150-5p抑制物(mi R-150-5p-inhibitor)及其阴性对照(miR-inhibitor-NC)转染hPDLSCs;采用real-timeRT-PCR检测碱性磷酸酶(ALP)、R unt相关转录因子2(Runx2)、骨桥蛋白(OPN)及mi R-150-5p水平;采用蛋白质印迹法检测ALP、Runx2、OPN、β-连环蛋白(β-catenin)、转录因子4 (TC F-4)及基质金属蛋白酶2 (MMP2)的蛋白表达水平;使用ALP检测试剂盒测定ALP活性。结果:分离培养的h PDLSCs经成骨诱导后,其ALP、R unx2及OPN转录水平随培养天数增加逐渐升高(P<0.05),而mi R-150-5p水平逐渐下降(P<0.05),即miR-150-5p水平与hPDLSCs成骨分化呈相反变化趋势;mi R-150-5p-inhibitor转染的h PDLSCs中,ALP、Runx2、OPN转录及表达水平,Wnt通路分子β-catenin、TCF-4及MMP2表达水平,以及A LP活性均显著增加(均P<0.05);当miR-150-5p-inhibitor联合Wnt信号通路抑制剂(IWR-1)处理h PDLSCs后,miR-150-5p下调引起的ALP、Runx2、OPN及MMP2表达和ALP活性增加均出现显著性逆转(均P<0.05)。结论:MiR-150-5p下调能够通过激活Wnt信号通路促进h PDLSCs成骨分化及MMP2表达,提示低水平的miR-150-5p有利于hPDLSCs的成骨分化过程。