miR-375在骨关节炎软骨中的表达及对软骨细胞增殖和凋亡的影响

摘要

目的 探讨miR-375在骨关节炎软骨中的表达及对软骨细胞增殖和凋亡的影响.方法 选择60例行膝关节置换术患者的骨关节炎软骨组织标本,另选择20例正常软骨组织作为对照.采用酶两步消化法获取并原代培养骨关节软骨细胞,利用Lipofectamine 2000分别将miR-375 inhibitor和miR-375 NC转染至软骨细胞,并分为miR-375 inhibitor组、阴性对照组和空白对照组.qRT-PCR法检测软骨组织及骨关节软骨细胞中miR-375的表达水平;MTT法检测各组细胞的增殖活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR法和Western blot法分别检测各组细胞中Bcl-2、Cleaved Caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平.结果 miR-375的表达水平在骨关节炎软骨组织中要明显高于正常软骨组织(P<0.05).与空白对照组和阴性对照组比较,miR-375 inhibitor组miR-375表达水平明显降低(P<0.05);各时段的增殖能力减弱、凋亡率增加(P<0.05);Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平均降低(P<0.05),Cleaved Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05).结论 miR-375在骨关节炎软骨组织中高表达,降低miR-375的表达能抑制骨关节软骨细胞的增殖能力,促进其凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2、Cleaved Caspase-3表达水平有关.