Cav1.2钙通道片段CT1融合蛋白的制备及生物学活性鉴定

摘要

目的 诱导表达Cav1.2钙通道片段CT1与谷胱甘肽转移酶(GST)重组的融合蛋白并进行纯化和鉴定.方法 将pGEX-6p-3/CT1重组质粒转化入E.coli BL21中并诱导表达,采用非离子去污剂B-per的方法分离纯化GST-CT1融合蛋白,使用Western blot技术鉴定GST-CT1融合蛋白,pull-down assay实验方法检测GST-CT1融合蛋白的生物学功能.结果 非离子去污剂B-per能够成功分离纯化GST-CT1融合蛋白,识别此片段的特异性抗体能够检测到GST-CT1融合蛋白;制备获得的GST-CT1融合蛋白具有与钙调蛋白结合的生物学功能.结论 技术简单、操作快速的非离子去污剂B-per能够分离纯化具有生物学功能的GST-CT1融合蛋白.