微小核糖核酸-6216对过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激损伤的保护及机制研究

摘要

目的:探讨微小核糖核酸-6216(miR-6216)对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制.方法:正常体外培养AC16心肌细胞,建立H2O2氧化应激损伤模型,分为对照组、H2O2组、H2O2+miR-6216组、H2O2+miR-con组、H2O2+ miR-6216+ pcDNA-control组、H2O2+miR-6216+pcDNA-E2F1组.qRT-PCR检测心肌细胞miR-6216表达量;MTT法测定各组心肌细胞存活率;流式细胞数检测心肌细胞凋亡率;应用试剂盒检测CK-MB、MDA、SOD;双荧光素酶报告基因实验miR-6216与E2F1的靶向作用;Western blot法检测Bax、Bcl2、E2F1蛋白表达.结果:H2O2不同剂量组心肌细胞存活率显著降低(P＜0.05),miR-6216表达量显著降低(P＜0.05),与H2 O2+ miR-con组相比,H2O2 +miR-6216组心肌细胞存活率显著升高(P＜0.05);与control组相比,H2O2组心肌细胞CK-MB、MDA含量及Bax蛋白表达水平显著升高(P＜0.05),心肌细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),而SOD水平、Bcl2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),上调miR-6216表达能够显著逆转H2O2对心肌细胞凋亡率及氧化损伤的作用;miR-6216可负向调控靶基因E2F1表达;E2F1过表达可逆转上调miR-6216表达对H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.结论:上调miR-6216表达可通过下调E2F1表达而减轻H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤.