体外模拟冠状动脉痉挛微环境中窖蛋白-1与一氧化氮及内皮素-1相关性的研究

摘要

目的:研究体外模拟冠状动脉痉挛(内皮功能异常为基础)微环境中窖蛋白-1(caveolin-1,cav-1)与一氧化氮(nitric oxide,NO)及内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的相关性.方法:1.分离培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC).2.①脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建内皮功能损伤细胞模型,分组:空白对照组、阴性对照组、50mg/L、100mg/L、200mg/L,每组分别干预12h、24h.②鉴定:细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞活性;Annexin V/PI法检测细胞凋亡率;测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)抑制率.3.①在2的基础上用10μmol/L乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)干预细胞以模拟冠状动脉痉挛微环境,单用Ach为对照组;激光共聚焦技术检测胞浆Ca“([Ca“]i)评价模拟效果.②三种终产物检测:硝酸还原酶法检测NO含量,酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测ET-1含量,Western-blot法检测cav-1蛋白表达情况.结果:①LPS干预条件为50mg/L 24h及100mg/L 24h时可成功构建内皮功能损伤细胞模型,与阴性对照组相比:细胞活性下降(P＜0.01),细胞凋亡率增高(P＜0.05),SOD抑制率下降(P＜0.05).②与单用Ach处理组相比:LPS (50mg/L 24h)+Ach组[Ca“]i峰值降低不明显(P＞0.05),LPS(100mg/L 24h)+ Ach组降低明显(P＜0.05);两实验组均NO分泌减少(P＜0.05),ET-1分泌增多(P＜0.01);LPS 50mg/L组cav-1表达增多不明显(P＞0.05),LPS 100mg/L组增多明显(P＜0.05);cav-1表达与NO分泌呈负相关(r=-0.7475),与ET-1分泌呈正相关(r=0.7509).结论:Cav-1在体外模拟内皮功能异常导致冠状动脉痉挛过程中发挥一定作用,分别与NO、ET-1分泌呈负相关、正相关.