甲/戊型肝炎重组抗原的表达、纯化及与传统甲肝疫苗免疫原性的比较

摘要

目的 比较基因工程重组抗原与传统疫苗的免疫原性;探讨同一载体表达不同抗原的能力和抗原间的相互作用.方法 将编码甲型肝炎病毒Vp1 aa24-171和戊型肝炎病毒ORF2 aa431-615的重组表达质粒pBV220-EAAg342及pBV220-AEAg342转化入大肠杆菌BL-21,筛选出高效表达的菌种进行目的 蛋白的表达.用DEAE-sepharose FF和CM-sepharose FF离子层析交换柱纯化表达重组蛋白,采用SDS-PAGE、Western blotting方法进行分析鉴定.用纯化的重组蛋白及传统甲肝疫苗灭活疫苗与减毒活疫苗免疫小鼠,比较特异性抗体的产生水平.结果 表达的重组蛋白相对分子质量约为36 000,表达量约占菌体总量的25%;且重组嵌合抗原EAAg342可以形成直径10～20 nm的类病毒(virus-like particles,VLP)颗粒.Western blotting证实2种重组蛋白均能分别与甲型肝炎和戊型肝炎患者阳性血清发生特异性反应.免疫小鼠后可诱导产生高滴度的抗戊肝特异性抗体;而抗甲肝特异性抗体水平与传统甲肝疫苗相比较低.结论 使用原核系统表达的甲/戊肝重组抗原能够高效表达,2种不同的融合蛋白均分别具有良好的抗原性和免疫原性,具有开发双价疫苗及同时诊断甲型戊型肝炎试剂盒的前景.