液相色谱法测定小鼠脑组织中ATP、ADP及AMP含量

摘要

建立小鼠脑组织中腺苷酸含量测定的高效液相色谱（high performance liquid chromatogram,HPLC）-可变波长检测法.方法应用酸沉淀蛋白、Agilent1200高效液相色谱系统、Supelco Discovery C18（150 mm ×4.6 mm,5μm）反相色谱柱及相同填充材料的预柱,对小鼠脑组织样品中腺苷酸进行分离分析,波长为254nm,流动相为30 mmol/L K2HP04-KH2PO4（含5％甲醇）,pH5.85,流速为1.0 mL/min,进样体积为20μL,柱温为30℃.结果腺苷酸ATP、ADP及AMP在10 ～ 100 mg/L范围,线性关系良好,线性方程为ATP:A=28.924C+ 14.144,γ=0.99990；ADP:A =31.504C - 12.608,γ=0.99992；AMP:A =46.539C -5.255,γ=0.99995.平均回收率为95.3％～103.2％；日内和日间相对标准差(RSD)分别为1.14％～1.75％、2.45％ ～3.97％.结论高效液相色谱-可变波长检测法可以简便、准确、有效地测定急性重复低氧小鼠脑组织中ATP、ADP和AMP的含量.