大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织中活性氧自由基表达的时程变化

摘要

目的 采用大鼠大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion, MCAO)再灌注模型,研究缺血脑组织再灌注后活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)的时程变化,探讨ROS在脑缺血损伤中的作用.方法 采用数字表法将25只健康雄性SD大鼠随机分为5组:假手术(Sham)组,MCAO组(缺血90 min,再灌注3、6、12、24 h),每组5只大鼠.使用线栓法制作大鼠缺血90 min再灌注模型,术中监测大鼠平均动脉压及肛温,使其保持在正常范围.每组大鼠分别于再灌注后3、6、12、24h时处死,迅速取脑组织进行TTC染色,检测大鼠脑梗死体积,并制作新鲜脑组织冰冻切片,采用ROS特异性染色方法——H2DCF-DA荧光染色法,检测再灌注后不同时间点缺血半暗带区ROS的表达.结果 1)在MCAO手术过程中,Sham组以及MCAO组大鼠的平均动脉压及肛温差异无统计学意义.2)Sham组大鼠脑内无缺血半暗带区,其相应脑区内只可见极少量的H2DCF-DA阳性染色细胞.而MCAO组大鼠再灌注后3,6,12,24 h4个时间点,脑组织半暗带区域均可见大量的H2DCF-DA阳性染色细胞.且从再灌注3h起,MCAO组大鼠脑组织半暗带区域H2DCF-DA阳性染色细胞数量持续增加,其中再灌注6h与3h相比,差异有统计学意义(P＜0.05),再灌注24h与12h相比,差异有统计学意义(P＜0.05).3)TTC染色结果显示,Sham组大鼠无脑梗死发生.MCAO组大鼠脑组织随再灌注时间的延长(从3h到24 h),相对梗死体积逐渐增大,差异有统计学意义(P＜0.05).4) MCAO组大鼠脑组织H2DCF-DA阳性细胞数目与脑梗死体积比率呈正相关(r=0.833,P＜0.01).结论 局灶性脑缺血模型大鼠再灌注后缺血侧脑组织中ROS量随再灌注时间延长递增,ROS在脑缺血再灌注损伤中具有重要作用.