大西洋庸鲽(Hippoglossus hippoglossus L.)hipposin抗菌肽在毕赤酵母中的表达及其纯化

摘要

Hipposin是大西洋庸鲽(Hippoglossus hippoglossus L.)组蛋白H2A的N端衍生物,共含51个氨基酸残基,具有抑制革兰氏阳性和阴性菌的活性.根据毕赤酵母密码子偏爱性对编码hipposin的cDNA (hip)进行密码子优化,并在5'端添加信号肽酶kex 2识别位点的编码序列、3'端添加6×His标签编码序列,两个末端分别添加XhoⅠ和Xba Ⅰ酶切位点,与表达载体pPICZαA构建重组表达载体pPICZαA-hip;电转至毕赤酵母X-33中,经Zeocin筛选以及对酵母基因组DNA的PCR鉴定,获得高拷贝酵母转化子;将其在30℃,250 r/min培养,使用1％的甲醇诱导表达目的蛋白;采用固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化目的蛋白.培养96 h时目的蛋白的表达量最高;Western Blot分析显示,表达产物能与His单克隆抗体发生特异性反应;培养上清经纯化后获得高纯度的重组体HIP,但发现部分产物被蛋白酶降解.研究结果为hipposin抗菌肽的扩大制备奠定了基础.