大鼠carabin腺病毒干扰载体构建及功能鉴定

摘要

目的:构建高滴度大鼠carabin腺病毒干扰载体(Ad-carabin-shRNA).方法:设计3对carabin-shRNA寡核苷酸序列,分别构建3个ADV4-U6-CMV-carabin-shRNA腺病毒穿梭质粒,将构建好的ADV4-U6-CMV-carabin-shRNA和pHBAd-BHG质粒共转染293A细胞,以包装Ad-carabin-shRNA,采用微量全细胞病变法检测病毒滴度.Ad-carabin-shRNA感染H9C2心肌细胞,实时荧光定量PCR和Western blotting检测carabin mRNA及蛋白表达.结果:3个ADV4-U6-CMV-carabin-shRNA干扰质粒构建成功,相对应的Ad-carabin-shRNA包装顺利,病毒滴度均为9×108 TU/mL.感染H9C2心肌细胞后,Ad-carabin-shRNA-1和Ad-carabin-shRNA-2均有显著干扰效果,carabin mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.01).结论:Ad-carabin-shRNA构建成功,在心肌细胞中具有干扰carabin的效应.