易错PCR提高粘质沙雷氏菌磷脂酶A1活性

摘要

利用易错PCR技术对来自粘质沙雷氏菌PL-06的磷脂酶A1基因plaB进行定向改造,通过引入不同浓度Mg2+、Mn2+得到的易错PCR产物与表达型质粒pET-28a(+)重组,构建磷脂酶A1突变文库,筛选出高酶活突变株EPB8.该突变酶相对野生酶酶活提高了22.5％,并对突变株EPB8产酶条件进行优化,优化后酶活较野生酶酶活提高41％.序列分析表明:plaB基因有11个碱基发生突变,导致7个氨基酸发生突变,其中磷脂酶A1蛋白有3个氨基酸突变,分别是y97C、p98S、X228L,辅助蛋白有4个氨基酸突变,分别是p46L、Q58L、N136D、H233R.该实验结果为进一步在分子水平定向提高磷脂酶A1的活性奠定了基础,也为该酶在其他高表达系统中的表达提供了素材.