部分蜘蛛牵丝Ⅰ型蛋白基因的合成及其聚合体在大肠杆菌中的表达

摘要

已知蜘蛛牵丝Ⅰ型蛋白N端序列不完整,有大量多聚丙氨酸基序组成的重复区.根据已报道的金纺者(Nephilaclavipes)相应基因序列,合成若干寡核苷酸链,通过PCR获得编码涵盖三组多聚丙氨酸基序的基因片断.并以此为单体,经过酶切和连接获得重复区分别为2、4、8拷贝的聚合体.序列及RNA二级结构比对显示:所获8聚体与已报道基因编码的氨基酸同源性高达84%,但8聚体基因mRNA具有较低能级.将上述3种聚合体基因分别克隆大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-30a(+),经IPTG诱导、利福平阻断菌体基因表达及在培养基中添加35S-Met,通过放射自显影可见由T7启动子引发的特异目的基因表达带.